INVESTIGACIÓN

“Salud Veterinaria y Zoonosis” (SALUVET) (http://www.ucm.es/info/saluvet/) es un grupo de investigación “consolidado” de la Universidad Complutense de Madrid. Sus objetivos en investigación abarcan diversas áreas de interés en el campo de la Sanidad Animal y de la Salud Pública. La formación de nuevos investigadores y personal técnico y la divulgación de las investigaciones realizadas son también objetivos relevantes para SALUVET. Los profesores que integran el grupo participan en la docencia de grado y posgrado. Por último, SALUVET presta asesoría y servicio técnico a empresas del sector agropecuario y sanitario, desarrollando una intensa actividad de desarrollo de patentes y de transferencia de conocimientos. Las principales líneas de investigación se resumen a continuación. La descripción del avance científico que suponen los objetivos de investigación, su novedad y relevancia se realizan para cada línea propuesta.

Línea 1. Desarrollo de vacunas frente a patógenos reproductivos relevantes en rumiantes y suidos

En relación al desarrollo de vacunas frente a la neosporosis bovina el grupo investigador SALUVET está trabajando en el desarrollo de nuevas vacunas de subunidades basadas en la utilización de proteínas del parásito asociadas a al estadio de bradizoíto y a la virulencia de N. caninum, así como, extractos de taquizoíto enriquecidos en fracciones de membrana/organelas. Los estudios se han centrado en el estudio de su seguridad y eficacia en un modelo gestante de ratón previamente desarrollado por el grupo de investigación utilizando sistemas de adyuvantación de nueva generación, saponinas purificadas o la micro/nanoencapsulación. Además, como fruto de estas investigaciones, se ha procedido a evaluar la eficacia de esta combinación utilizando adyuvantes de nueva generación específicos de rumiantes suministrados por la empresa farmacéutica Zoetis. De forma paralela, se han probado diversos métodos de nano/microencapsulación con taquizoítos completos inactivados y con extractos de taquizoíto enriquecidos en fracciones de membrana y organelas y evaluado su immunogenicidad en el ratón. Los resultados formarán parte de una nueva publicación en espera de proceder a la protección intelectual de los resultados. Además, se han empleado otros adyuvantes clásicos (saponinas) y de nueva generación (suministrados por Zoetis) para la evaluación de la fracción enriquecida en el modelo murino, mostrando unos resultados muy prometedores. Por último, como parte integrante de esta línea se han iniciado nuevas investigaciones conducentes a la normalización de un modelo gestante en ovino de la infección por N. caninum para evaluar la eficacia de nuevas vacunas y fármacos frente a la infección. El desarrollo de dicho modelo forma parte de las tareas del proyecto financiado por la Swiss National Science Foundation en colaboración con el Instituto de Parasitología de la Universidad de Berna y SALUVET (Of mice and sheep: prevention and treatment of Neospora caninum infections).

La tricomonosis bovina es una enfermedad parasitaria de transmisión sexual considerada como causa importante de fallo reproductivo y que actualmente está presente en nuestro país, ocasionando grandes pérdidas económicas y siendo un importante factor limitante en la productividad de las explotaciones de vacas nodriza. En la actualidad no hay agentes terapéuticos eficaces frente a la tricomonosis bovina y aunque existe una vacuna comercial disponible en los EE.UU., su uso no está permitido en Europa. En este sentido el desarrollo de una vacuna para el control de esta enfermedad en zonas donde la prevalencia es alta, estén presentes factores de riesgo y no se realicen pruebas diagnósticas en los toros, sería el medio más rentable para minimizar las pérdidas económicas que produce la enfermedad. Consecuentemente, el grupo SALUVET en colaboración con el SERIDA (Servicio Regional de Investigación y Desarrollo Agroalimentario) ha iniciado un estudio para la mejora de la eficacia de los productos vacunales actualmente comercializados, con el fin de desarrollar una vacuna inactivada frente a la tricomonosis bovina que pueda ser registrada y comercializada en Europa. Para ello se han probado diferentes antígenos vacunales formulados con el adyuvante QuilA y se han administrado por diferentes rutas (subcutánea e intranasal), con el objetivo de inducir la síntesis de anticuerpos a nivel de la mucosa vaginal, impedir la adhesión del parásito, acortado la infección. La eficacia de la vacunación se evaluado en un modelo bovino y se ha observado una mejora en el tiempo de eliminación de la infección en el tracto genital de la hembra, tanto si se compara con el grupo no vacunado como aquel inmunizado con la vacuna comercial. Ante estos prometedores resultados, los futuros estudios van a ir encaminados a mejorar aún más la eficacia de estas formulaciones y poder obtener un producto final en un tiempo razonablemente corto. En este nivel ya se han iniciado conversaciones con empresas del sector que pudieran estar interesadas.

Desarrollo de vacunas frente a patógenos reproductivos relevantes en suidos. El Síndrome Reproductor y Respiratorio Porcino (SRRP) es una de las enfermedades con mayor significación en la producción porcina a escala mundial Uno de los problemas más importantes que plantea hoy en día el control de la enfermedad, es la falta de eficacia que presentan las vacunas frente a desafíos con cepas heterólogas. Esta falta de eficacia se debe muy probablemente a la elevada variabilidad antigénica del virus, que limita la reactividad cruzada de los anticuerpos desarrollados tras la vacunación. La finalidad del proyecto en curso AGL2011-30133 2012-2014 dentro del plan estatal de investigación científica y técnica y de innovación, es tratar de identificar los epítopos neutralizantes presentes en las distintas proteínas del virus y determinar si están implicados en fenómenos de neutralización homóloga o heteróloga con el fin último de identificar aquellos epítopos capaces de inducir una respuesta inmune que neutralice a una amplia variedad de virus, los cuales podrían potencialmente proporcionar protección a los individuos frente a un amplio rango de desafíos heterólogos. Para alcanzar esta finalidad, se plantean tres objetivos: 1.-la secuenciación de las ORFs que codifican las proteínas estructurales del VSRRP en cepas que difieren en su susceptibilidad a neutralización, 2.- la construcción y caracterización de la actividad neutralizante frente al VSRRP de una librería de fragmentos Fab de inmunoglobulinas porcinas en fagos y 3.- la caracterización de los epítopos neutralizantes presentes en las distintas proteínas estructurales del virus y determinación de su implicación en el desarrollo de anticuerpos neutralizantes de amplio espectro.

Línea 2. Epidemiología y diagnóstico de diversas protozoosis de los rumiantes.

El grupo investigador ha puesto a punto y ha validado las diferentes técnicas de diagnóstico serológico que se emplean en la actualidad en el diagnóstico de la besnoitiosis bovina, no solo en el caso del ganado bovino sino también para su empleo en rumiantes silvestres con el objetivo de poder emplearlas en estudios de epidemiología. Asimismo, el grupo investigador ha puesto a punto técnicas de diagnóstico molecular (PCR convencional y PCR cuantitativa) para poder emplearlas en estudios de patogenia. Por otra parte, el grupo investigador está realizando diferentes abordajes en paralelo con el objetivo último de desarrollar nuevas pruebas de diagnóstico serológico que mejoren la sensibilidad y especificidad de las actuales técnicas. Para ello ha realizado diferentes estudios proteómicos con el objetivo de identificar nuevas dianas diagnósticas, ha desarrollado y está caracterizando un panel de anticuerpos monoclonales que reconocen diferentes epítopos de proteínas del estadio de taquizoíto con el objetivo de desarrollar una prueba ELISA de competición y, se están estudiando reacciones cruzadas con otro protozoo cercano taxonómicamente, Sarcocystis spp. Finalmente, se han realizado diversos estudios de epidemiología que han puesto de manifiesto que: i) la besnoitiosis bovina afecta fundamentalmente al ganado de carne localizado en zonas de montaña donde la enfermedad es endémica; ii) está ampliamente distribuida en el ganado de carne de los Pirineos describiéndose un 87% de prevalencia de rebaño y un 50% de prevalencia individual; iii) elevadas tasas de incidencia serológica y clínica tras realizar un estudio longitudinal en tres rebaños con besnoitiosis a lo largo de 4 años; iv) detección de un corzo y un ciervo seropositivos procedentes del Pirineo en un estudio de prevalencia en rumiantes silvestres de la Península Ibérica.

En los últimos años, varios estudios realizados por el grupo SALUVET (proyectos CCG08-UCM/AGR-4223, y RTA2009-00136-C02) han puesto de manifiesto un incremento de la expansión geográfica de la tricomonosis bovina, siendo considerada actualmente enfermedad re-emergente en nuestro país. Este hecho es debido a que su transmisión se ve influenciada por las prácticas de manejo habituales en explotaciones de vacuno de cría, como son la monta natural, pastos compartidos, toros comunales, la falta de pruebas diagnósticas y la libre circulación de animales. Los datos de prevalencia obtenidos en los últimos años por el grupo SALUVET, indican que esta enfermedad es frecuente en las explotaciones de vacas nodrizas en nuestro país. Actualmente, el diagnóstico de esta enfermedad, junto con la campilobacteriosis genital bovina está formando parte del control sanitario que realiza de rutina el veterinario en explotaciones con monta natural. Actualmente, se está colaborando a través de un proyecto MAGRAMA con la asociación ganadera de Araparda, para estudiar la prevalencia y impacto de esta enfermedad en los rebaños de la raza, y se han iniciado diversas reuniones con los representantes de las asociaciones de Avileña y Retinta, para incluir el diagnóstico de la tricomonosis bovina en el control sanitario de sus sementales. Se ha solicitado financiación a través de un proyecto Anhiwa para el desarrollo de un método rápido para la detección de la infección por T. foetus basado en un sistema de inmunocromatografía, en el que parte de su realización colaborará la empresa Ingenasa.

Línea 3. Estudios de la patogenia de diversas enfermedades reproductivas en rumiantes y suidos.

En relación con la patogenia de la neosporosis, el grupo SALUVET ha iniciado nuevos estudios de infección experimental en pequeños rumiantes, tanto en el ovino como el caprino para estudiar la clínica, la dinámica de la infección y la respuesta inmune tras la infección por N. caninum en pequeños rumiantes. Estas investigaciones permitirán la normalización de modelos experimentales de la neosporosis alternativos al ratón y al bovino para la evaluación de nuevos fármacos y vacunas (ver anteriormente en línea 1). Las investigaciones en ovino forman parte del proyecto financiado por la Swiss National Science Foundation en colaboración con la Universidad de Berna (ver línea 1). También se han iniciado las investigaciones en caprino como parte del proyecto “Neosporose em caprinos: dinámica e repercussoes da infecçao natural e reproduçao experimental da enfermedade” financiado por el CNPq de Brasil en colaboración con el grupo de la Universidad Federal Rural de Pernambuco dirigido por el Dr. Rinaldo Mota. Los primeros resultados son similares en relación a patogenia a la infección en el bovino, incluyendo la presencia de abortos y la transmisión transplacentaria del parásito. Estos al menos constituirán la base de dos publicaciones. Por último, se ha presentado una nueva propuesta de proyecto a la convocatoria 2013 del Ministerio de Economia y Competitividad “Retos Investigación: Proyectos I+D+I” basada en la identificación de los mecanismos implicados en la virulencia de N. caninum durante el ciclo lítico en la infección en el hospedador. El objetivo final es la identificación de factores de virulencia que podrían ser usados como candidatos vacunales, junto con otras proteínas ya estudiadas por nuestro grupo.

En el campo de la patogenia de la besnoitiosis bovina se desarrollarán modelos in vitro en los que se estudiará la variabilidad intra-especie de B. besnoiti sobre un panel de aislados procedentes de diferentes países, los cuales serán previamente caracterizados molecularmente mediante la técnica de microsatélites. Se determinarán parámetros relacionados con la virulencia, capacidad de invasión y proliferación, de los diferentes aislados a lo largo de su ciclo lítico en dos líneas celulares distintas, incluyendo una línea celular diana del parásito durante la fase aguda de la enfermedad. Los resultados obtenidos nos permitirán: i) poner a punto modelos in vitro que, posteriormente, se emplearán para evaluar seguridad y eficacia de un panel de fármacos con posible utilidad en la especie de destino, el ganado bovino; ii) determinar la existencia de variabilidad intra-específica en la virulencia; y iii) seleccionar un aislado en base a su virulencia, que, posteriormente, se empleará en la estandarización un modelo de infección experimental por B. besnoiti en el ganado bovino, tanto en la fase aguda como en la crónica, empleando dos dosis y dos vías de inoculación.

Estudios de la patogenia de enfermedades reproductivas en suidos. En relación a esta línea en los últimos años se ha trabajado en la variabilidad del virus delSíndrome Reproductor y Respiratorio Porcino (SRRP) , puesta de manifiesto desde muchos puntos de vista y empezando por la variabilidad biológica, demostrada desde la aparición de la enfermedad por las diferencias encontradas en el crecimiento de las cepas en distintos sistemas celulares, la variabilidad patogénica, confirmada por el gradiente en la gravedad de la sintomatología observada tanto en animales en crecimiento como en reproductores y por último la variabilidad genómica, a medida que se han obtenido y caracterizado aislados del VSRRP. Desde el año 2004 y con continuidad, se ha trabajado en estudios de variabilidad genómica, antigénica y patogénica de cepas españolas y europeas del virus, sus posibles implicaciones en el control de la enfermedad o en la eficacia de una cepa pluripotente en la prevención del fallo reproductivo, utilizando diferentes modelos animales en porcino tanto respiratorio como hembra gestante.

 BESNOITIOSIS

besnoitiosis

NEOSPOROSIS

neosporosis

 

 TRICOMONOSIS                                                              

Trico

 

CAMPILOBACTERIOSIS    

Campy